甾类同化激素类药物残留分析技术测定方法（六）

[db:作者] / 2022-12-13 00:00

(7)组学技术

为了能够高效地追踪ASs滥用情况，有必要开发新的筛选技术进行非法药物筛查。基于转录组学、蛋白质组学、代谢组学等“omic”技术，可以通过间接检测其生理作用的方法来发现蛋白同化激素滥用。

Riedmaier等介绍了应用这些组学技术寻找ASs生物标志物(biomarker)及检测其残留的潜力。该研究组通过鉴定牛血细胞中潜在的基因表达生物标志物，监管ASs使用。采用实时定量反转录聚合酶联反应(qRT-PCR)定量mRNA基因表达改变，而血液细胞是寻找生物标志物的理想材料。据报道，ASs可影响不同血细胞的mRNA基因表达。试验选择18头小母牛，平均分成两组，每组9头。一组为空白对照组，另一组给予醋酸群勃龙和雌二醇复方制剂，连续给药39天。采取3个点血样检测其mRNA表达情况，通过生物标志物图谱筛选候选基因。结果显示，醋酸群勃龙和雌二醇能够显著影响甾体类受体(ER-a和GR-a)、细胞凋亡调控元件Fas、炎性白细胞介素(IL-1a、IL-1β、IL-6)、MHCII、CK、MTPN、RBM5和β-肌动蛋白mRNA基因的表达。通过主成分分析(PCA)显示这些基因是血液中醋酸群勃龙和雌二醇联合使用的潜在标志物。

2011年，Anizan等采用甾体类靶向II相代谢物分析，调查分析了动物繁殖过程中天然甾体类固醇激素滥用情况。研究采用给动物外源给药雄烯二酮，寻找潜在的生物标志物，监测甾体类固醇激素在动物体内的残留状况。该研究首次建立了样品制备方法，尿液需先冻干，然后加入纯水溶解，经乙酸乙酯LLE提取，SAX固相萃取柱净化，用水和甲醇-水(25+75，v/v)进行淋洗，用0.2%甲酸甲醇和10%氨化甲醇分别进行洗脱，氮气吹干后，甲醇-水(20+80，v/v)复溶，UPLC-MS/MS测定，结果筛选到葡萄糖醛酸本胆烷醇酮、硫酸表雄酮等代谢产物。Regal等通过HPLC-线性离子阱静电场轨道阱组合式高分辨质谱(LTQ-Orbitrap)来获取代谢物组学数据。血清样品从饲养的奶牛中收集，或者从畜牧饲养不使用性激素(雌二醇-17 β或其酯苯甲酸雌二醇和孕激素)的奶牛中收集。经过适当的数据处理和多变量统计分析(OPLS-DA)，有可能突出重要的血清代谢修饰，从而管理雌二醇和孕激素的使用。这些差异被用来建立预测模型，去监控管理这些激素在牛中的非法使用。雌激素和孕激素的潜在生物标志物被指出，但还需要结构解释和说明。

基于ASs引起的生理学变化，采用组学技术开发新的筛选方法，并用于检测其残留含量，这项技术将极具前景。一些非常灵敏的方法，如定量RT-PCR、质谱，能够定量基因、蛋白表达或代谢物的细微变化，在生物信息学统计工具的帮助下，可以从实验数据中获取有价值的信息。总之，利用组学技术发现新的物质、监测畜牧业药物滥用，将是未来的挑战。

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