河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中16种苯并咪唑类药物残留量测定分析条件的选择

[db:作者] / 2022-12-22 00:00

17.2.2.7 分析条件的选择

(1)提取条件的优化

1)提取剂

苯并咪唑类药物分子基本上是中等极性分子，其水溶性很差，考虑到乙酸乙酯和二氯甲烷的极性与BZs接近，BZs在其中溶解能力较强，分别对乙酸乙酯、二氯甲烷、DMF(二甲基甲酰胺)、DMSO(二甲亚砜)等有机溶剂提取BZs的提取效率进行试验。

试验结果表明采用二氯甲烷提取BZs，回收率均低于50%；与采用单纯的乙酸乙酯作提取剂相比，DMSO与乙酸乙酯混合溶剂对苯并咪唑的提取无明显帮助，且给后续的处理带来麻烦；

DMF与乙酸乙酯混合溶剂对2AA、ASOX、THI-OH三种极性较大的代谢物的回收率有明显的负影响，回收率下降至只有10%～20%，而采用碱性乙酸乙酯提取BZs，回收率可稳定在理想水平。

2)提取剂pH

BZs是弱碱性化合物，pH对具有弱碱性的物质的溶解性或分配系数影响很大，调节pH使组分在水相中处于中性分子状态，或达到两性分子的等电点，水溶性降低，易被有机溶剂萃取。分别以不加碱液、0.5mL 1mol/L KOH、0.2mL 50%KOH、0.4mL 50%KOH作对比试验考察提取溶剂pH对苯并咪唑药物在动物组织中提取效率的影响，试验结果表明提取剂的pH高低对ALB、OXI的回收率无明显影响，CAM、FEN、FLU、MEB、OXFSUL、THI、THI-OH在较高碱液浓度(0.4mL 50%KOH)时回收率明显下降一半，2AA、ASOX、ASF的回收率下降至10%以下。基于以上试验结果，当同时测定16种苯并咪唑药物残留时综合考虑极性较大的几种代谢物受pH影响明显的现象，以0.15mL 50%的氢氧化钾-乙酸乙酯作提取剂。

3)抗氧化剂

一些苯并咪唑药物在样品前处理过程中易发生氧化反应而致损失，所以试验过程中在样品提取及随后的蒸发浓缩过程中加入抗氧化剂以保护分析物，分别试验了不同浓度的BHT(丁基化羟基甲苯)、BHA，试验结果表明加入1%BHT或BHA可明显提高0XF、OXFSUL、ASOX、ASF的回收率，对THI、MEB的回收率也有好的影响，BHT对分析物的保护作用稍好于BHA。

(2)净化条件的优化

样品用碱性乙酸乙酯提取，由于乙酸乙酯属中等极性溶剂，有可能提取出类脂物，因此提取浓缩后需去除类脂物。脱脂溶剂选择了对类脂物有良好溶解度而对苯并咪唑类药物溶解度最小的正己烷。为保证部分水溶性较小的苯并咪唑类药物组分在脱脂时的回收率，采用乙腈-0.1mol/L HCL-正己烷萃取脱脂。

试验中选择了国内外目前最常用的WATERSOasisMCX8固相萃取柱进行试验，考虑到动物样品成分复杂，特别是动物肝脏样品较脏，为防止样品过载导致回收率下降，选用了150mg/6mL的MCX柱。根据MCX柱的保留特性，应在酸性条件下.上柱，使待测物呈阳离子键合吸附，所以采用0.1mol/LHCL稀释样液上柱，保证样品在柱上有强保留。

洗涤是除去不需要的组分或杂质，所用溶剂的极性一般略强于或等于样品溶剂的极性。试验结果表明酸性条件下用100%甲醇溶液洗涤SPE柱，组分无损失，故选用5 mL 0.1 mol/L HCL，5mL甲醇溶液作为洗涤溶剂。

氨水-乙腈溶液对于MCX固相萃取柱是强溶剂。试验中依次增加氨水含量的乙腈溶剂体系进行洗脱试验，试验结果表明采用10%氨水乙腈作为洗脱试验液可保证所测组分的充分洗脱，同时进行10%氨水乙腈洗脱液的体积淋洗试验，结果表明大于12mL时可以淋洗完全。最后选择15mL 10%氨水乙腈溶液作为洗脱溶剂。

(3)仪器条件的优化

试验了不同有机溶剂(甲醇、乙腈)对苯并咪唑分子的离子化影响，试验结果表明大部分苯并咪唑类药物分子采用乙腈作为流动相中的有机溶剂时，较之采用甲醇作为流动相能得到更强的质谱信号，表明乙腈比甲醇更有利于苯并咪唑类分子的离子化。

根据文献的描述，选定了16种苯并咪唑类驱虫药的二级质谱产物离子各：二对共计三十二个，进行质谱离子源参数的优化，包括电压参数：去簇电压(DP)，聚焦电压(FP)，入口电压(EP)，碰撞能(CE)、碰撞池出口电压(CXP)，电离电压(IS)；气流参数：雾化气(NEB)，气帘气(CUR)，辅助气(AUX)，碰撞气(CAD)；辅助气温度(TEM)。

研究了苯并咪唑类药物的二级质谱离子产生途径，研究结果表明苯并咪唑类驱虫药的母核是一个相对稳定的共轭体系，在通常的碰撞能量范围内(CE15-60V)较少发生开环重排反应，苯并咪唑驱虫药的碰撞裂解反应大部分是发生在取代基位置。苯并咪唑类药物从结构上可细分为氨基甲酸酯类和噻苯咪唑二个亚类，在所研究的十多种苯并咪唑类药物和代谢物中，氨基甲酸酯类和噻苯咪唑类药物的质谱碎裂途径各有其特点。根据十五课题的研究成果，选定了十六个苯并咪唑类药物和代谢物的定性离子对。

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