阿维菌素类药物残留测定方法（三）

时间：2023-03-24 21:00:01来源：food栏目：食品快速检测阅读：

阿维菌素类药物残留测定方法（三）

[db:作者] / 2022-12-26 00:00

(4)液相色谱-质谱法(liquid chromatography mass spectrometry，LC-MS)

由于检测器选择性的限制，HPLC方法存在灵敏度相对较低的缺点。随着电喷雾电离(ESI)及大气压化学电离(APCI)技术的快速发展，单四极杆(MS)、离子阱(MSn)、三重四极杆(MS/MS)、飞行时间(TOF)等分析器的相继出现，不仅使AVMs的检测灵敏度提高，而且能方便地对AVMs，多残留组分进行同时检测。同时，根据MS提供的离子信息，能够进行结构确证。[M-H]-、[M+H]+和[M+Na]+加合离子是LC-MS分析中常选用的监测离子。IVM的裂解方式(图21-2)代表了AVMs的分子裂解机理。LC-MS已成为目前AVMs残留分析的首选。

图21-2 IVM的主要裂解途径

1)液相色谱-单级质谱法(LC-MS)

早期报道的AVMs确证技术主要采用LC-MS方法，且主要选用APCI源。Heller等采用LC-粒子束电离源(PBI)-MS在负离子化学电离(NCI)方式下检测牛奶和牛肝中的IVM。样品提取液经在线碱性氧化铝柱净化后，进LC-MS测定，用小孔径的C18色谱柱分离，梯度洗脱，流动相中加入适量的醋酸铵提高离子化效率。选择离子监测(SIM)模式下，检测IVM母离子和4个碎片离子进行确证。由于存在一定的基质效应，采用基质匹配标准曲线定量。该方法的LOD为4ng。Wu等报道了猪肝中AVM和IVM的检测方法。样品提取液用IAC柱净化后，进LC-MS检测。色谱柱为Zorbax Eclipse XDB-Cs柱，甲醇-水(85+15，v/v)为流动相，流速0.5mL/min，采用APCI源，在负离子模式下监测[M-H]-离子。添加水平在5～100μg/kg时，AVM和IVM的平均回收率分别为74%～94%，65%～87%。其LOD均为5μg/kg。Ali等开发了牛肝中EPR、M0OX、AVM、DOR和IVM的多残留检测方法。样品的乙腈提取液用C8柱和碱性氧化铝柱净化后进LC-MS测定。采用APCI源，正离子模式监测，通过与标准溶液或阳性添加样品的保留时间和离子丰度的比较来定性。采用该方法对添加浓度为25ppb的阳性控制样品进行了确证。Turmipseed等采用LC-非放电APCI(ND-APCI)-MS来检测AVM。采用商业化的LC-APCI源，但关掉了电晕放电。与常规ESI和APCI源相比，该电离方式是利用药物在溶液中形成的阳离子或Na加合离子，对某些化合物而言，ND-APCI源具有更高的灵敏度和选择性。作者采用该技术成功分析了牛奶中的AVM。

2)液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)

LC-MS/MS可以采用APCI、ESI和APPI三种电离源。

A.APCI源

Howells等建立了牛肝脏中AVMs的定量和确证方法。为便于阴离子的形成，分析物在碱性pH下进行LC分离，APCI电离负离子模式监测，MSn多级质谱分析，每个母离子各监测2个子离子。

EPR、AVM、DOR、MOX和IVM的CCB分别为3.1ng/g、3.2ng/g、2.2ng/g、4.0ng/g和3.2ng/g，平均回收率分别为70.9%、69.1%、65.9%、69.7%和73.2%，RSD为11.6%、3.9%、6.4%、9.3%和10.5%。Campillo等报道了牛奶中EPR、AVM、DOR、MOX和IVM的分析方法。样品提取液进LC-MSn，采用APCI源电离，负离子模式，多级质谱检测。方法LOQ为0.1～2.4ng/g，回收率在89.5%～105%之间，RSD小于9%。

B. ESI源

ESI是目前AVMs的LC-MS分析中最常采用的电离方式。

Hino等在ESI正离子模式下检测牛肝中AVM、IVM、EPR、DOR和MOX残留。分析物用TSK-GEL ODS 100V色谱柱分离，乙腈和含0.1%甲酸的0.1mmol/L甲酸铵溶液为流动相，梯度洗脱，流速0.2mL/min，多反应监测模式(MRM)检测，基质匹配标准曲线定量。方法回收率在87.9%～99.8%之间，日内精密度为1.5%～7.4%，日间为1.5%～8.4%。郑卫东等采用LC-MS/MS同时测定猪肝脏中AVM和IVM的残留量。样品提取净化后，进仪器分析。ESI电离正离子，MRM模式检测，以保留时间和子离子比定性，外标法定量。方法LOD均为2.0μg/kg，LOQ为5.0μg/kg；添加水平在2～20μg/kg范围内，AVM和IVM的平均回收率分别为77.0%～83.3%和76.9%～79.8%，RSD分别小于12.1%和13.0%。Rubensam等报道了采用LC-MS/MS确证分析牛肉中AVMs的残留分析方法。样品经溶剂提取，低温冷冻除脂后，LC-MS/MS确证检测。方法平均回收率为88.9%～100.7%，重复性CV为0.78%～5.1%，重现性CV为0.28%～9.0%；方法灵敏度满足MRLs要求。Hernando等开发了鲑鱼肌肉中AVM、IVM、DOR的LC-MSMS测定方法。样品用乙腈提取，氧化铝柱净化后进样分析。采用粒径1.8um的小颗粒填料色谱柱分离，再进混合四极杆/线性离子阱(QqQ(LIT))系统，ESI电离，通过线性加速(LINAC)高压碰撞室，允许MS在MRM模式下快速扫描采集。作者对减少驻留时间对谱图质量和灵敏度的影响进行了评估，当驻留时间由50ms减小到10～20ms，谱峰面积和信噪比都有增加。方法灵敏度优于μg/kg级别，样品处理中不需要浓缩，仪器的定量限(ILQ)为0.15～5ppb；采用基质匹配标准曲线定量，方法回收率为80%～95%。

Dahiya等建立了牛奶中IVM、DOR和MOX的分析方法。LC-MS/MS采用ESI正离子、MRM模式，检测碎片离子:892.71>569.6、892.71>551.5(IVM)，916.88>593.83、916.88>331.40(DOR)，640.85>199.03、640.85>498.61(M0X)。IVM、DOR和MOX的LOD分别为0.1、0.1和0.2μg/kg，LOQ分别为0.2、0.2和0.5μg/kg。Sheridan等报道了快速检测牛奶中AVM、IVM、DOR、EPR和MOX的多残留分析方法。样品用乙腈提取后，LC-MS/MS进行定性、定量分离检测，质谱选用ESI正离子监测。该方法LOD为0.016～0.117μg/kg。Durden等采用LC-MS/MS测定了牛奶中的AVM、DOR、EPR、IVM和MOX。AVM、DOR和IVM结构中只含有C、H、O元素，可以用ESI负离子模式监测；其他药物含有N元素，可以用ESI正离子模式监测。作者对正、负两种电离方式进行了比较。在负离子模式下，采用三乙胺-乙腈为流动相，以SEL为内标，AVM、DOR、IVM、EPR和MOX的线性范围为1～60μg/kg，方法LOD为0.19～0.38μg/kg；当以甲酸-甲酸铵-乙腈为流动相，正离子模式下检测时，具有最佳的灵敏度，线性范围为0.5～60ug/kg，方法LOD为0.06～0.32μg/kg；但负离子监测的线性更好，更稳定。Frenich等报道了采用超高效液相色谱-电喷雾-串联质谱(UPLC-ESI-MS/MS)方法检测鸡蛋中IVM的残留分析方法。方法回收率在60%～119%之间，RSD小于25%，LOQ低于5μg/kg。

Wang等建立了猪肉、猪肝、鱼肉和牛奶中AVM、IVM、DOR和EPR的测定方法。分析物用UPLC分离，在ESI电离、正离子，MRM模式下检测，整个分析时间在3.5min以内。采用基质匹配标准曲线定量，4种AVMs的LOD和LOQ分别为0.05～0.68μg/kg和0.17～2.27μg/kg；方法回收率在62.4%～104.5%之间。

C.APPI源

Turnipseed等报道了采用LC-MSn多级质谱技术检测牛奶中EPR、IVM、DOR、MOX的残留分析方法。样品用乙腈提取，C18柱净化后，LC-MSn检测。作者对大气压光化电离源(APPI)电离、APPI/APCI复合电离和ESI电离的响应强度进行了比较，发现与药物性质和流动相构成有关。当监测负离子时，使用紫外灯可以增加MS的响应；然而，采用APPI/APCI复合电离源，正离子监测，且关掉电晕放电电流，无论是否打开紫外灯时，能够获得最佳响应值。采用MSn多级技术确证。当EPR和IVM在添加水平1～20μg/kg，DOR和MOX在5～20μg/kg时，方法回收率大于60%，RSD小于20%。

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