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吡唑酮类药残留测定——液相色谱-质谱法

时间:2023-03-25 00:50:02来源:food栏目:食品快速检测 阅读:

 

吡唑酮类药残留测定——液相色谱-质谱法

[db:作者] / 2022-12-20 00:00

(7)液相色谱-质谱法(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)

HPLC法不能提供结构方面的信息,无法对目标化合物进行确证,也无法分析复杂基质中痕量残留化合物。LC-MS特别是液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS),集液相色谱高效分离与质谱的高鉴定能力于一体,在药物残留分析领域得到了广泛应用,推动了复杂基质(如动物肌肉、肝脏、肾脏)中多残留分析的发展。

由于吡唑酮类药物理化性质的不同(安乃近及其代谢物为碱性药物,而保泰松、羟布宗为酸性药物),一般采取不同电离模式进行质谱测定。

1)碱性药物

安乃近及其代谢物显碱性,质谱检测电离一般选正离子模式。安乃近的二级代谢物FAA、AA和AAA性质较为稳定,采用外标法定量可以得到满意的结果;而其一级代谢物MAA稳定性相对较差,通常采用内标法进行定量。

沈金灿等建立了牛和猪肌肉中安乃近代谢物残留的LC-MS/MS分析方法。采用Atlantis C18色谱柱(150mm×2.1mm,3.5μm)分离,流动相为5 mmol/L乙酸铵溶液(pH 4.5)和乙腈,梯度洗脱,流速0.3mL/min;喷雾电压5.0kV,去簇电压40V,聚焦电压200V,碰撞室射入电压10V,碰撞室射出电压15V,去溶剂温度450℃,电喷雾(ESI)正离子、MRM模式检测。FAA和AAA采用外标法定量,AA和MAA以4-异丙氨基安替比林(4-iso propylaminoantipyrine,IAA)作为内标定量。FAA和AA的LOD为1.0μg/L,AAA和MAA为0.5 μg/L;在添加浓度5~200ng/g范围内,FAA的回收率为81.6%~94.0%,AAA为81.2%~90.2%,AA为82%~101%,MAA为78.5%~87.0%;RSD均在7%以内。研究表明,采用正离子模式进行质谱检测时,通常需要在溶液中维持一定的酸度使分析物容易质子化而带正电荷;然而pH太低,各组分的保留降低,容易与基质组分共洗脱而使其响应受到抑制。在pH4.5条件下,以5mmol/L醋酸铵缓冲体系作为流动相,各组分得到比较好的分离,并且质谱上有较强响应。实验还发现,即使在中性和室温条件下,低浓度的安乃近在缓冲溶液中也容易迅速转化成MAA。张骊等建立了猪肉中氨基比林、安替比林、安乃近代谢物FAA、AA、AAA和MAA残留检测超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)。色谱柱为Waters BEH C18(2.1mm×5mm,1.7um),流动相为含0.1%甲酸的乙腈和0.1%甲酸溶液,梯度洗脱,柱温30℃,流速0.3 mL/mL;质谱条件为ESI+、MRM方式。在5~500ng/mL范围,基质匹配标准曲线呈线性;平均回收率为71.5%~100%;批内、批间CV均小于10%;LOD为2μg/kg,LOQ为5μg/kg。Jedziniaka等建立了牛肉中安乃近代谢物FAA、AA、AAA和MAA残留的LC-MSMS测定方法。样品用C8色谱柱(150mm×2.1mm,3.5um)分离,流动相为甲醇-乙腈(8+2,v/v)和0.01mol/L甲酸铵溶液(pH5.0),流速0.3mL/min,梯度洗脱,离子源温度600℃,毛细管电压5.5kV,ESI+、MRM模式检测。实验室内CV为7%~30%;回收率为45%~95%;MAA、FAA、AAA和AA的CCa分别为113μg/kg、11.6μg/kg、11.6ug/kg和12.6μg/kg,CCβ分别为139μg/kg、16.5μg/kg、15.8μg/kg和16.4μg/kg。张崇等建立了羊肌肉组织中安乃近4种主要代谢物(MAA、AA、FAA和AAA)的亲水LC-MS/MS分析方法。肌肉样品均质后,用体积分数为5%的氨水乙腈提取,提取液用Cleanert PSA初步净化,60℃氮气吹干,乙腈复溶后过MAX柱净化,采用亲水LC-MS/MS测定,4种物质均采用外标法定量。在5 μg/kg、50 μg/kg、100μg/kg、1000ug/kg 4个添加浓度,方法回收率在75.02%~116.2%之间,日内CV为1.63%~15.12%,日间CV均小于11%;MAA、FAA和AAA的LOD均为0.5μg/kg,AA为5μg/kg。

沈金灿等还建立了牛奶和奶粉中FAA、AAA、MAA和AA的LC-MS/MS检测方法。采用BEH C18色谱柱分离,流动相为5mmol/L乙酸铵溶液(pH4.5)和甲醇,梯度洗脱,流速0.25mL/min,柱温40℃;ESI+、MRM模式检测,喷雾电压3kV,碰撞气为氩气,辅助气为氮气,辅助气流速750L/h,辅助气温度350℃,离子源温度105℃。FAA、AAA和AA采用外标法定量,MAA采用IAA为内标定量。FAA、AA、AAA、MAA的LOD分别为0.24μg/kg、0.59μg/kg、0.20μg/kg和0.61μg/kg;在添加量5~20μg/kg范围内,4种安乃近代谢物的回收率在80.4%~97.9%之间,RSD均小于9%。

Penney等建立了牛奶、牛肉、猪肉中安乃近及其代谢物残留的测定方法。色谱柱采用Inertsil ODS-3柱,流动相为0.05mmol/L甲酸铵-乙腈,梯度洗脱,流速0.3mL/min,LC-ESI+-MS/MS,MRM模式检测。FAA、AA和MAA的基质匹配标准曲线线性范围为0.02~0.20ug/g,安乃近为0.2~2.0ug/g;牛奶和猪肉中各药物回收率在82%~128%之间,CV均小于11%;FAA、AA和MAA的LOD小于0.02μg/g,安乃近的LOD小于0.13μg/g。

2)酸性药物

保泰松和羟布宗呈酸性,LC-MS检测用负离子模式电离。

Clark等分别采用液相色谱-单极四极杆质谱(LC-MS)和液相色谱-离子阱质谱(LC-MSn)检测牛肾中保泰松残留。色谱柱为YMC ODS-AQ柱(2mm×100mm,3μm),流动相为乙腈和乙酸铵缓冲液,梯度洗脱。LC-MS测定质谱离子源为ESI、SIM模式检测,脱溶剂气为氮气,流速10L/min,温度200℃,源内电压-165V,雾化气为氮气,气压80psi。在25μg/kg添加浓度,5个样品中有2个满足检测确证阳性条件,另外3个检测信噪比(S/N)小于3。而LC-MSn则采用ESI、MRM模式检测,毛细管电压-3.88kV,毛细管温度350℃,检测灵敏度大于LC-MS,在5~10ppb添加浓度,均可全部检出。

Dubreil-Cheneau等用甲醇提取牛奶中羟布宗、保泰松等12种药物后,直接进LC-MS/MS分析。以C18色谱柱(150mm×2mm,5μm)分离,流动相为1mmol/L乙酸+乙腈(90+10,v/v)和乙腈,梯度洗脱,流速0.4mL/min,三重四极杆质谱以ESI、MRM模式检测。质谱条件:样品管和脱溶剂温度为350℃,毛细管电压4000V,鞘气压力为35任意单位,辅助气压力为10任意单位,离子吹扫气压为25任意单位,碰撞气压1mTorr,驻留时间50ms。方法CCβ为0.5μg/kg,回收率为94.7%~110.0%,CV为2.9%~14.7%。Gentili等采用LC-MS/MS测定牛奶和牛肉中保泰松等15种药物。用XTerra-MS C18(150mm×4.6mm,5μm)色谱柱分离,流动相为乙腈-甲醇(1+1,v/v,含0.2mmol/L二丁胺)和水,梯度洗脱,流速1mL/min,分流比1:9,10%进入三重四极杆质谱分析。离子源为涡轮离子喷雾(Turbo lon Spray),干燥气和源温度为200℃,负离子源模式,毛细管电压-4500V,MRM模式监测。牛奶中保泰松的CCa和CCβ分别为0.71μg/kg和1.23μg/kg,牛肉中为0.92μg/kg和1.84μg/kg;回收率接近100%。

3)酸性和碱性药物同时检测

本类药物的酸碱性不同,但采用分开进样或电离源正负离子切换方式,可同时测定保泰松、羟布宗、安乃近代谢物等吡唑酮类药物。

Jedziniak等建立了牛奶中保泰松、羟布宗和安乃近4个代谢物等药物的LC-MS/MS同时检测方法。样品经乙腈-乙酸铵缓冲溶液提取,提取液分成两份,一份用于直接测定碱性药物安乃近及其代谢物,另一份经氨基SPE柱净化后,测定酸性药物保泰松和羟布宗。采用Phenomenex Luna C8色谱柱分离,流动相为甲醇-乙腈(8+2,v/v)和0.01 mol/L甲酸铵(pH5.0),梯度洗脱,流速0.2mL/min,ESI电离,离子源温度600℃,毛细管电压为-5.5kV(负离子模式)和+5.5kV(正离子模式),MRM模式检测。保泰松和羟布宗为负离子,安乃近代谢物FAA、AA、AAA和MAA为正离子模式。CV为7%~28%,回收率为71%~116%;MAA的CCa和CCβ分别为55ug/kg和61μg/kg,AAA、AA和FAA的CCa和CCβ均在5.2~6.8μg/kg之间,保泰松和羟布宗的CCa和CCβ均在2.7~3.2μg/kg之间,满足残留测定要求。

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