IDA-壳聚糖金属螯合吸附剂

[db:作者] / 2023-01-05 00:00

IDA-壳聚糖金属螯合吸附剂

固定化金属亲和层析法(Immobilized Metal AffinityChromatography,简称IMAC)具有螯合介质吸附容量大，选择性及通用性较好，易于再生，成本低等优点，逐渐成为分离纯化蛋白质等生物工程产品最有效的技术之一。随着基因工程的发展，通过基因融合表达策略可大量制备N-端或C-端融合了6个组氨酸的目标重组蛋白质。

固定化金属亲和吸附剂是固定化金属亲和层析成功的关键。壳聚糖是来源丰富的环境可再生资源，具有良好的生物相容性。将壳聚糖用作蛋白质分离纯化和酶固定化基质材料具有很好的应用前景。王晓军选用壳聚糖为基质载体、戊二醛为交联剂、环氧氯丙烷为活化剂、亚氨基二乙酸(IDA)为螯合配基制备金属螯合亲和吸附剂，研究了制备过程中各因素对吸附剂吸附性能的影响。

壳聚糖载体亲和吸附剂的制备：

①交联。称取一定量壳聚糖，加入1% (体积分数)的CH3COOH溶液，搅拌至完全溶解。滴入一定量戊二醛，搅拌交联4h。在快速搅拌下加入2mol/L的NaOH溶液，将pH值调至8.0附近，使壳聚糖呈颗粒状沉淀。收集沉淀，水洗至中性，加入NaOH搅拌还原40min，水洗至中性，抽滤。

②活化。取一定量交联壳聚糖加入一定比例和浓度的NaOH与二甲亚砜(DMSO)的混合溶液中。充分搅匀，25℃下缓慢滴加1.2mL体积比为0.3的环氧氯丙烷，升温至40℃，170r/min下振荡反应一段时间，用大量水洗至中性，滤干。

③螯合配基的键合。取13.31gIDA，8gNaOH溶解至100mL，向活化后的交联壳聚糖中加入一定体积后定容至50 mL，在恒温振荡器中于一定温度反应一段时间。洗涤至中性，用布氏漏斗抽干，得壳聚糖螯合凝胶。

④取螯合凝胶装柱(1. 3cm×15cm)，用0.1mol/L的CuSO4溶液灌流，凝胶柱螯合铜离子至饱和后用0.05mol/L，pH值为7.5的Tris.HCI缓冲液清洗，可得到鳌合铜离子的亲和吸附剂，然后再测定一些因素对其的影响。

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