液相色谱-串联质谱法测定河豚鱼、鳗鱼及烤鳗中9种糖皮质激素残留量

时间：2023-03-25 02:56:17来源：food栏目：食品快速检测阅读：

液相色谱-串联质谱法测定河豚鱼、鳗鱼及烤鳗中9种糖皮质激素残留量

[db:作者] / 2022-12-19 00:00

10.2.1.1 适用范围

适用于河豚鱼、鳗鱼及烤鳗中9种糖皮质激素(泼尼松龙、泼尼松、氢化可的松、可的松、甲基泼尼松龙、倍他米松、地塞米松、倍氯米松、醋酸氟氢可的松)残留量的液相色谱-串联质谱测定。方法检出限：泼尼松龙、泼尼松、氢化可的松、可的松、甲基泼尼松龙、倍他米松、地塞米松为0.2μg/kg；倍氯米松、醋酸氟氢可的松为1.0μg/kg。

10.2.1.2 方法原理

河豚鱼、鳗鱼及烤鳗中泼尼松龙、泼尼松、氢化可的松、可的松、甲基泼尼松龙、倍他米松、地塞米松、倍氯米松、醋酸氟氢可的松9种糖皮质激素残留，加入无水硫酸钠，用乙酸乙酯提取，提取液浓缩后，经过硅胶固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。方法检出限：泼尼松龙、泼尼松、氢化可的松、可的松、甲基泼尼松龙、倍他米松、地塞米松为0.2μg/kg；倍氯米松、醋酸氟氢可的松为1.0μg/kg。

10.2.1.3 试剂和材料

甲醇、乙腈、乙酸乙酯、正已烷、丙酮：色谱纯；甲酸：优级纯。

丙酮-正己烷溶液：丙酮+正己烷(2+3，v/v)。量取200mL丙酮与300mL正已烷混匀。无水硫酸钠：分析纯。在650℃马弗炉中灼烧6h，储存于干燥器中。

泼尼松龙、泼尼松、氢化可的松、可的松、甲基泼尼松龙、倍他米松、地塞米松、倍氯米松、醋酸氟氢可的松(CAS：514-36-3)标准物质：纯度≥98%。

1.0mg/mL标准储备溶液：分别准确称取适量的糖皮质激素标准物质，用甲醇溶解，分别配制成1.0mg/mL储备溶液。配成的标准储备液应在温度低于-20℃冰箱中保存。

5.0μg/mL标准工作溶液：分别准确吸取适量的糖皮质激素标准储备溶液，用甲醇分别配制成5.0μg/mL标准工作溶液。配成的标准工作溶液应在温度低于4℃冰箱中保存。

混合标准工作溶液I：分别吸取适量的氢化可的松和可的松标准工作溶液，用甲醇配成浓度为0.05μg/mL的混合标准工作溶液。此溶液应在温度低于4℃冰箱中保存。测定样品使用时，用20%乙腈溶液将混合标准工作溶液I配成不同浓度的混合标准工作溶液。

混合标准工作溶液II：分别吸取适量的泼尼松龙、泼尼松、甲基泼尼松龙、倍他米松、地塞米松倍氯米松、醋酸氟氢可的松标准工作溶液，用甲醇配成泼尼松龙、泼尼松、甲基泼尼松龙、倍他米松、地塞米松为0.05μg/mL，倍氯米松、醋酸氟氢可的松为0.25μg/mL的混合标准工作溶液。此溶液应在温度低于4℃冰箱中保存。

基质混合标准工作溶液：测定样品使用时，用空白样品提取液将混合标准工作溶液II配成不同浓度的基质混合标准工作溶液。此溶液应现用现配。

CleanertSilica固相萃取柱或相当者：500mg，6mL。使用前用6mL正己烷预处理，保持柱体湿润。

10.2.1.4 仪器和设备

液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI)；分析天平：感量0.1mg和0.01g；固相萃取真空装置；真空泵：真空度应达到80kPa；均质器；振荡器；高速冷冻离心机：转速13000r/min；旋转蒸发器；氮气浓缩仪；具塞塑料离心管：50mL；样品管：10mL；梨形瓶：150mL。

10.2.1.5 样品前处理

(1) 试样制备

从全部样品中取出有代表性样品约1kg，充分搅碎，混匀，均分成两份，分别装入洁净容器内。密封作为试样，注明标记。在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。将试样于-18℃冷冻保存。

(2)提取

称取5g试样(精确到0.01g)，置于50mL具塞塑料离心管中，加入10g无水硫酸钠，加25mL乙酸乙酯，用均质器均质1min，在振荡器振荡20min，以10000r/min离心10min，取上清液至梨形瓶中。再用25mL乙酸乙酯提取一次，合并上清液，用旋转蒸发器于45℃水浴上减压蒸发至近干，用1mL乙酸乙酯和5mL正己烷溶解。

(3)净化

将提取液移至经预处理的Cleanert Silica固相萃取柱中，用6mL正己烷洗涤梨形瓶和萃取柱，弃去全部流出液。减压抽干1min，用6mL丙酮+正己烷(2+3，v/v)洗脱，收集洗脱液于10mL样品管中，用氮气浓缩仪吹干，用1mL 20%乙腈溶液溶解残渣，以4000r/min离心5min，上清液过0.2μm滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。

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